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百日咳實驗室檢測技術指南

行業新聞  | 2024-5-29


    為指導各級醫療機構和其他檢測機構規范開展百日咳實驗室檢測工作,準確識別百日咳確診病例,確保檢測質量,提高檢測效率,制定本指南。


一、樣本采集

(一)采樣人員要求。從事標本采集的技術人員應經過生物安全培訓,熟練掌握標本采集方法和操作流程。


(二)樣本采集。樣本種類主要有鼻咽拭子、鼻咽吸取液、血清等??ㄋ诨虔d咳期早期患者建議采集鼻咽拭子,持續咳嗽2—3周或以上的患者建議開展血清學檢測。


二、實驗室檢測

(一)百日咳鮑特菌培養。

1.菌株分離培養。細菌培養優先采集鼻咽拭子,其次為鼻咽吸取液。采集鼻咽拭子后,可直接接種培養基,也可經增菌培養后接種,增菌可提高培養陽性率。培養基一般為含選擇性添加劑的鮑-金培養基(B—G培養基)或木炭瓊脂培養基(R—L培養基)平板。如不能立即接種,需將鼻咽拭子放入轉運管中,4℃冷藏運送至實驗室,分區劃線接種后35℃—37℃培養,每日檢查有無疑似菌落,連續觀察3—7天,若無任何細菌生長痕跡,第7天可報告百日咳鮑特菌陰性。若有疑似菌落生長,及時挑取疑似菌落,在不含選擇性添加劑的B—G培養基或R—L培養基平板上進行純菌分離培養。


2.結果判定。培養到百日咳鮑特菌,結合臨床表現可診斷為百日咳確診病例??赏ㄟ^觀察菌落形態、革蘭染色鏡檢、生化反應等進行菌落種屬鑒定,也可采取特定靶基因核酸檢測、基因組測序或質譜檢測等方式進行種屬鑒定。


(二)百日咳鮑特菌核酸檢測。

1.提取DNA。核酸檢測優先采集鼻咽拭子,其次為鼻咽吸取液,也可使用培養接種后的拭子進行核酸檢測。為提高核酸檢測陽性率,建議單獨采樣。將拭子在無菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液中洗脫,離心去除上清液,沉渣提取DNA,用于核酸檢測;如不能立即提取,可—70℃保存備用。


2.結果判定。國內常用實時熒光PCR技術檢測百日咳鮑特菌。核酸檢測結果陽性,結合臨床表現可診斷為百日咳確診病例。陰性結果應進一步排除假陰性,假陰性的可能原因包括:樣本質量差;樣本采集時間過早或過晚;樣本保存、運輸和處理不當;其他原因如PCR抑制等。


(三)血清學檢測。

1.適用范圍。百日咳鮑特菌血清學檢測不適用于嬰幼兒、1年內接種含百日咳成分疫苗和既往感染的個體。


2.檢測方法和質控。常用的血清學檢測方法是酶聯免疫吸附試驗(ELISA),以雙份血清或單份血清的PT—IgG抗體為檢測指標。檢測試劑盒結果PT—IgG抗體濃度數據可溯源至國際標準單位。每次檢測需同時檢測試劑盒提供的陰性和陽性質控品。


3.結果判定。對于百日咳疑似病例或臨床診斷病例,具有以下任一項者,可明確診斷:單份血清百日咳鮑特菌PT—IgG抗體濃度超過診斷急性感染的標準閾值(試劑盒推薦閾值);恢復期血清PT—IgG抗體滴(濃)度較急性期呈4倍及以上升高。


(四)全基因組測序。

全基因組測序參照國家致病菌識別網《細菌純培養物二代基因組測序操作規范》《細菌純培養物二代加三代基因組測序操作規范》執行。


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